[생물학실험보고서]
1. 실험 제목 : DNA work
2. 실험 목적 : 세균의 세포벽을 파괴하고 plasmid DNA를 분리한다. 분리한 plasmid DNA를 형질전환을 시키고 배지에서 키운다. 배지에서 키운후 제한효소를 이용해 잘라낸뒤 전기영동을 시켜서 관찰한다.
3. 재료 :
-Echerichia coli(Competent cell : DH5), plasmid DNA(pUC19 vector, 마이크로 피펫, 소형 원심분리기, E-tube, Ice, plasmid DNA purification kit, Resuspension buffer(50mM glucose, 25mM Tris·Cl (pH 8.0), 10mM EDTA (pH 8.0), RNase A), Lysis buffer(0.2N NaOH, 1% SDS), Neutralization buffer(5M potassium acetate, glacial acetic acid), competent cell, spreader, alcohol lamp, LA plate, water bath, DNA, restriction enzyme, enzyme buffer, 1kb marker, loading dye, 1xTAE buffer, agarose, EtBr, electrophoresis kit, gel 판, comb, hand detector
4. 실험과정
1. colony 1개를 Antibiotics(예 - Ampicillin)가 포함된 liquid LB 5ml에 접종하고
37도℃ shaking incubator에서 12~16시간(O/N) 키웠다.
2. Bacteria가 자란 LB중 1ml을 E-tube로 옮겼다.
3. 12,000rpm 30초(또는 3,000rpm 15분)간 원심분리하고 상층액을 완전히 버렸다.
4. Resuspension buffer를 250㎕넣고 vortexing을 하여 pellet을 완전히 풀어주었다.
.... |
2012.04.12
4페이지
