-Date
-Title
①DNA Isolation
②PCR(polymerase chain reaction)
③전기영동(electrophoresis)
-Object
①박테리아로부터 DNA를 분리해 낸다.
②특정 DNA 부위를 반복 합성하여 원하는 DNA 분자를 증폭 시킨다.
③전기영동은 DNA를 크기에 따라서 분리하는 방법이다.
-Materials
Methods
①Cell lysis sol, proteinase K, RNase, PPT sol, e-tube, DNA binding sol, spin colmn, column washing sol, water, 원심분리기
1. Cell lysis sol 300㎕ (inverting)
2. proteinase K 10㎕ (inverting) 56℃에서 15분
3. RNase A 3㎕ 37℃에서 15분
4. PPT sol 100㎕→ Vortexing→ In ice에서 5분
5. 10분 동안 1300rpm centrifuge
6. 상등액 390㎕→ e-tube→ DNA binding sol 600㎕
7. 650㎕ in Spin column→ 1분 동안centrifuge
8. Column washing sol 600㎕→ 1분 동안centrifuge
9. Column washing sol 500㎕→ 1분 동안centrifuge
10. spin column을 새 e tube에 옮기고 water 100㎕를 넣고 5분 정지 후 1분 간 centrifuge.
②DNA polymerase, Template DNA, primers, dNTPs, mixture, reaction buffer, PCR tube, 증류수, pipette tip, pipette
(일반적으로 PCR 반응은 total volume 50l 로 수행함)
1. PCR tube에 NTPs buffer 4㎕와 reaction buffer 5㎕를 넣는다.
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2012.06.04
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