단백질의 검출
Ⅰ. 실험목적
생명현상과 생물체를 이루는 중요한 구성요소 중 단백질을 발색반응을 이용하여 화학적으로 검출하여 본다.
Ⅱ. 원리
▶ 밀론반응(millon s reaction)
밀론시약을 시료에 첨가하면, 단백질이 있는 경우는 백색침전이 생기고, 이것을 60~70℃로 가열하면 벽돌색으로 변한다. 이러한 반응은 단백질을 구성하고 있는 아미노산인 티록신, 디옥시페닐알라닌 등의 페놀고리가 수은화합물을 만들고, 아질산에 의해 착색된 수은착염으로 되기 때문이다.
(※주의 : 밀론시약은 독성과 부식성이 매우 강하기 때문에 주의해서 사용해야한다.)
▶ 크산토프로테인반응(Xanthoprotein reaction)
단백질의 발색반응의 하나로 시료에 소량의 질산을 가하여 몇 분간 가열하면 황색이 되며, 다시 암모니아수를 가하여 알칼리성으로 하면 색이 진하게 되어 주황색에 가깝게 되는 반응이다. 이 반응은 페닐알리닌․티로신․트립토판 등의 아미노산의 벤젠코리가 질산에 의해 니트로화되어 황색의 니트로화합물이 되기 때문에 일어난다.
▶ 뷰렛반응(Biuret reaction)
펩티드 결합이 두 개 이상 존재하는 구조를 뷰렛이라 하며 이 biuret structure가 Cu2+과 반응하여 보라색의 착화하물을 형성한다. 때문에 용액의 색깔이 보라색으로 변하게 되는 것이다. 모든 단백질은 기본적으로 무수히 많은 펩티드 결합으로 이루어져 있기 때문에, 뷰렛반응에 의해 뷰렛 용액을 보라색으로 변하게 한다. 단백질 뿐 아니라 3개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 펩티드도 뷰렛 반응을 통해 검출할 수 있다.
▶ 닌히드린반응(Ninhydirn reaction)
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2013.02.08
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