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형질전환 실험 - 대장균 DNA 전기영동 관찰
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형질전환 실험 - 대장균 DNA 전기영동 관찰
◆준비물
아이스버킷
아이스
Competent cell
SOC
항온수조
E tube
원심분리기
Colume tube
P1 250ml
P2 250ml
N3 350ml
PB 500ml
PE 750ml
EB 50ml
◆실험목적
LB plate(0.01% ampicillin)에 도말했다.
sample배지도 만들었다.
플라스미드가 들어갔는지 확인했다.
band가 나오는지 유무확인 했다.
DNA loading buffer를 이용해서 size크기를 비교해보았다.
◆가설
sample배지도 만들 수 있을 것 같고 LB plate(0.01% ampicillin)에 도말할 수 있을 것 같다 전기영동 구별을 하면 band가 나오는지 확인을 하는데 band의 굵기는 DNA양이 많이 나와 가려져서 안보이거나 2~3개지의 종류의 band 굵기가 나올 것 같다.
◆이론적 배경
반응능 세포(competant cell)
형질전환은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적인 성질이 변하는 일을 말한다. 형질전환은 1928년 영국의 F.그리피스가 폐렴쌍구균을 이용하여 실시한 실험이 계기가 되어 발견되었다. 다당류로 이루어진 두꺼운 막, 즉 협막을 가진 S형균으로부터 DNA를 추출하여 이것을 다당류성 협막을 가지지 않은 R형균에 작용시키면 R형균의 일부가 S형균으로 변한다. 이것은 S형 세균의 DAN 가 R형 세균 속에 들어가서 유전자 발현을 하기 때문이다. 전환을 일으키는데 필요한 DNA의 최소량은 약 10만분의 1 mol이며, DNA의 싱글스트랜드를 주는 것보다도 더블스 트랜드를 주는 쪽이 전환을 일으키기 쉽다. 형질전환 실험에 의하여 유전자의 본체가 DNA라는 것이 밝혀졌다. 그러나 고등생물에 있어서도 세균류에서 볼 수 있는 것 같은 형질전환 이 일어나는지 어떤지는 아직 밝혀지지 않았다.
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2014.05.23
3페이지
