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[화학실험] 단백질 분리정제 및 기능분석 - column chromatography의 준비로서의 buffer 만들기
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Report
1. 실험날짜
2. 주제
단백질 분리정제 및 기능분석 - column chromatography의 준비로서의 buffer 만들기
3. 목표
1M의 TRIS-HCl(pH 7.4), NaCl, MgSO Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl농도의 clution buffer를 만든다.
4. Introduction
1)buffer란 무엇인가
①완충용액(buffer solution)
산이나 염기가 약간 첨가되어도 pH가 거의 변하지 않는 용액을 말한다. 전형적으로 완충용액은 약산과 그 짝염기를 대략 같은 농도로 섞어 만든다. 완충용액은 용액에서 이온의 용해도를 조절할 때나 생화학적, 생리적 과정에서 pH를 유지할 때 중요한 역할을 한다.
②buffer의 작용 원리
산 또는 염기만 과량 녹아 있는 용액의 경우 외부에서 강산이 들어오면 그 양만큼의 염기 이온(A)이 양성자화되고, 강염기가 들어오면 그 양만큼의 산(HA)가 이온화되면서 [HA]:[A]의 비가 크게 변하게 된다. 반면, buffer에서는 HA와 A을 이미 비슷한 양을 가지고 있기 때문에, 강산 또는 강염기가 들어온다 하더라도 반응이 거의 진행되지 못하므로 [HA]:[A]가 거의 일정하게 유지된다. 이로 인해 pH가 거의 일정하게 유지된다고 보면 된다.
2)몰농도
M 은 의 약자이다. 0.1M(0.1 몰농도로 읽음) HCl 용액에는 용액 1당 0.1몰의 HCl(물론 이온으로 해리되어 있지만)이 있다. 몰농도는 묽은 용액의 조성을 기술하는 가장 흔한 방법이다. 그러나 몰농도는 온도에 따라 약간 변하는 결점이 있어 농도를 정확하게 계산하는데 적당하지 않다. 용액은 가열하거나 냉각시키면 부피가 변하므로 몰농도 또한 변한다.
3)pH미터의 사용법과 주의사항
①검출부를 보존용액에서 꺼내 증류수로 깨끗이 씻는다.
②기기의 Calibration 버튼을 누른다.
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2015.01.27
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