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일반생물학 실습 - immunohistochemistry와 위 양성반응 경로 차단
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일반 생물학 실습
[immunohistochemistry와 위 양성반응 경로 차단]
면역조직화학- 조직이나 세포내의 특정 항원을 항체로 표시 후 관찰하는 기술.
† 실험 목적
1) 항체반응을 이용하여 신경세포를 염색해본다.
2) 실험을 준비하는 과정에서 위 양성반응의 경로를 생각하고 차단하는
설계를 배운다.
† 준비물
Cryotomy – 절편을 위해
PBS – 조직을 씻거나 조직을 담굴 용액을 희석시킬 때 사용.
Hydrogen peroxide – Quenching을 통해 조직 내에 있는 과산화소체에 의한 위 양성반응을 막고, 후에 DAB를 산화시켜 염색하는 역할.
Normal goat serum – 세포막에서 나타날 수 있는 위 양성반응 경로 차단
DAB – 염색물질. 발암물질이다.
항체 – Primary antibody – Mouse Anti-GFAP antibody(Ig G)
Secondary antibody – Goat Anti-mouse Ig G antibody
† 실험 하기 전에
위 실험은 표적세포에서만 발견되는 단백질에 1차 항체를 붙이고, 그 1차 항체에 2차 항체를 붙인 후, 2차 항체에 붙어있는 peroxidase에 의해 DAB가 H₂O₂와 반응하여 갈색으로 염색되는 실험이다. 이렇게 실험이 진행되는 과정에서 두 가지 위 양성경로를 생각할 수 있다.
false positive reaction – 양성이 아님에도 나타남.
◆ 세포 내에 있는 과산화소체에 의해 표적세포가 아닌 다른 세포까지 염색이 되는 경우.
◆ 세포 표면에 있는 Fc 수용체가 2차 항체의 Fc부분과 맞아떨어져 다른 세포가 염색이 되는 경우.
이런 두 가지 경로를 막기 위해 이번 실험에서는 ①Quenching 과 ②Block이라는 과정을 거친다.
① Quenching(담그는 과정)
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2015.02.06
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