생화학실험 - 지질의 추출, TLC에 의한 지질의 분리
●실험목적: 쥐의 간에서 지질을 추출하고 TLC를 이용해 분리해보자.
① 지질의 추출
●실험원리
생체성분 중에서 물에는 불용성이고 유기용매에는 가용성인 물질을 총칭해서 지질이라고 한다. 영양학적으로 식품에서는 지질과 지방이 같은 의미로 사용되고 유지도 같은 의미로 사용된다. 지질은 일반적으로 단순지질(중성지질), 복합지질(극성지질), 유도지질(중성지질, 복합지질의 가수분해 산물)로 분류된다. 지질은 동물 체내의 모든 조직과 장기에 넓게 존재하고, 특히 피하, 콩팥 주위, 장간막, 근육 등에서는 지방세포로 만들어진 지방조직을 구성해서 다량으로 존재하며 이를 축적지방이라고 한다. 지방조직 이외의 조직, 장기의 지질은 복합지질의 비율이 높고, 이것을 조직지방(tissue fat)이라고도 하며 조직에서의 세포구조와 막기능의 유지를 위해 중요한 역할을 한다.
●시약 및 기구
Methyl alcohol
Chloroform
conrnical tube
Homogenizer
증류수
Vortex
Centrifuge
micro pipette
●실험방법
1. 간 1g을 칭량한다.
2. Chloroform : Methyl alcohol을 1:2비율로 3ml을 간 1g에 혼합한다.
3. Homogenizer용 유리관에 칭량한 간 1g을 넣고 혼합한 Chloroform:methyl alcohol을 전량 넣고 Homogenizer를 이용하여 분쇄한다.
4. Chloroform 1ml를 넣고 한번 더 분쇄한다.
5. 증류수 1ml을 넣고 한번 더 분쇄한다. 총 3번을 Homogenizer를 이용하여 간을 분쇄하게 된다.
6. Vortex를 이용하여 혼합하낟.
7. Centrifuge에서 12000rpm, 4℃의 조건에서 10분동안 원심분리 한다.
8. 상층액을 제거하고 하층액을 떠내어 덜어낸다.
② TLC(thin-layer chromatography)에 의한 지질의 분리
●실험원리
크로마토그래피에는 기체나 액체
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2017.03.19
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