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DNA증폭법
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1. Inside PCR reaction
PCR의 기본적인 원리를 이해하기 위해서 각각의 step 단위로 살펴보기로 한다. PCR machine은 단순히 온도를 정해진 program에 따라 올렸다 내렸다 하는 장치에 불과하다. 즉 PCR은 온도에 따라 denaturation, annealing, extension의 step이 한 cycle을 이루고 이러한 cycle들이 30회 정도 반복되어 지는 것이다.
2.Components of PCR
(1) Primer set
Primer set은 forward/reverse primer라고도 부르는데 이는 DNA의 방향성과 관련이 있는 용어이다. 일단 primer set은 원하는 target region의 상보적 strand의 각 5부위의 끝에 있는 수십 base pairs 정도의 sequences대로 인위적으로 합성한 oligonucleotides라고 이해하면 된다. 중요한 point는 상보적이라는 것과 3'end에서부터 Taq polymerase가 작용해 새로운 strand를 합성해 나가기 시작한다는 것이다.
(2) dNTPs
dNTPs는 nucleic acids (DNA,RNA)를 구성하는 LEGO block 같은 것으로 이해하면 된다. 중요한 것은 hydrogen bond가 3개인 GC 결합이 2개인 AT 결합보다 안정적이라는 것과 dNTPs는 단순한 building block의 역할을 하는 것뿐만이 아니라 polymerase가 nucleic acids를 합성해 나가는데 필요한 energy를 제공하는 역할도 한다는 것이다.
(3) Taq polymerase
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2011.03.11
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