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실험보고서 - 해양 미생물 DNA를 이용한 PCR 전기영동 실험
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1. Introduction
1)PCR
PCR 이란 DNA의 원하는 부분 (target sequence)을 증폭하는 방법이다.
denaturation, annealing, extension 3가지 과정으로 구성되어 있고
이 과정이(circle) 반복 되면서 DNA가 증폭된다.
PCR 과정
1단계[denaturation]-약 95도 정도에서 1~2분 정도 진행된다. 온도가 높아지면서 DNA사이에 있는 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어져 DNA가 두가닥으로 나눠진다.
2단계[annealing]- 약 60도 정도에서 30초 정도 진행된다. 분리된 DNA가닥에 primer이 결합되는 과정이다. Primer은 각각 target sequence에 따라 달라진다(상응하는 DNA 염기서열이 다르다) primer에 따라 온도와 시간이 달라진다.
3단계[extension]- 약 72도에서 2분정도 진행된다. taq polymerase가 합성되어 primer에서 DNA가 뻗어나간다.
pcr 구성요소
primer-PCR의 가장 중요한 요소로써 정확도를 결정한다. primer이 길경우
taq polymerase-바다 밑 뜨거운 곳에 사는 생명체로부터 추출한 효소로써 열 저항성이 높아 95도 까지 올라가는 extenstion 과정에서 이용되기에 적합하다.
dNTP(GATC solution 용액)-중합효소의 양을 늘려준다.
PCR buffer-Taq polymerase가 잘 활성화 될 수 있도록 도와주는 이온
2)전기영동
DNA를 크기에 따라 분리하는 방법이다. DNA는 phostphate group에서 음전하를 띄기 때문에 두 전극 사이에서 있을 때 양 전극으로 이동한다.
전기영동 구성요소
Agarose gel-투명하고 사용이 간편하며 DNA측정에 적합하다
TAE buffer-pH를 안정화 시키는 완충용액으로 전기영동 시 DNA를 이동시키는 운반체들이 이온이고 이런 이온을 buffer가 공급해준다.
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2014.06.19
3페이지
