Ligation
Transformation
Cloning vector
목적인 DNA를 삽입하여 대장균 등에서 증폭, 유지하기 위한 매개체로, vector DNA는 제한효소로 절단하여 상보적인 절단부위를 갖는 목적으로 하는 DNA 단편을 삽입하여 연결하고 숙주균에 도입할 수 있다
목적 DNA 단편을 연결한 vector DNA는 숙주균이 증식됨에 따라 복제하여 목적 DNA단편을 대대로 유지할 수 있다
Cloning vector의 종류
- Plasmid : pBR322, pUC18
- Phage : lambda phage, M13 phage
- Cosmid : Cos(from lambda phage) + plasmid
- Artificial chromosome(인공 염색체) :
BAC (Bacterial Artificial Chromosome),
YAC (Yeast Artificial Chromosome)
Plasmid vector의 장점
1. 복제기점(origin of replication)을 갖기 때문에 증식할 수 있다
2. 항생제 내성 유전자 (antibiotic resistance gene)
을 가져 selection marker로 사용될 수 있다
3. Multi cloning site(MCS)가
존재하여 원하는 유전자를 끼워 넣을 수 있다
제한효소(Restriction endonucleases)
특성에 따라 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ형 제한효소로
분류한다
DNA의 특정한 염기배열을 식별하고, 이중사슬 구조에서 nucleotide가 연결된 phosphodiester bond (인산-디에스테르 결합)를 절단하는 핵산분해 효소의 하나이다
Ⅰ형 (Type Ⅰ) : 제한효소와 메틸화효소가 뭉쳐져 있고, 인식자리와 제한자리가 서로 다르다. 염기서열은 특이적으로 인식하지만, 인식자리에서 약 1000개 염기 정도 떨어진 곳에서 비특이적으로 DNA를 자른다
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2013.05.01
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