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생물학실험 - DNA 추출, PCR의 원리 및 실험
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생물학실험 - DNA 추출, PCR의 원리 및 실험
[실험 방법]
-DNA 추출
1. Solution 1
2. Solution 2
3. Solution 3
4. Washing
5. Elution
-PCR
1. PCR tube에 dNTPs buffer 4 l와 reaction buffer 5 l를 넣는다.
2. Template DNA 1 l를 넣고 forward, reverse primer를 각각 0.5 l 씩 넣는다.
3. DNA polymerase 1 l를 넣는다.
4. 증류수 37 l를 넣고 잘 pipetting 해 준다.
5. PCR machine의 well에 tube를 넣고 반응시킨다.
[실험 재료]
-PCR
DNA polymerase, Template DNA, primers, dNTPs mixture, Reaction buffer, PCR tube, 증류수, pipette tip, pipette
[miniprep의 원리]
Plasmid DNA extraction
Plasmid를 분리해내는 방법은 추출량에 따라 miniprep, midiprep, maxiprep 이 있다.
기본적인 원리는 세균의 Cell wall을 Alkali lyssis method를 통해 깨부수고 DNA를 분리 한 후 다시 Chromosomal DNA와 plasmid DNA 중 plasmid만을 분리하는 것이다.
실험에 사용한 용액의 역할을 알아보도록 하자.
Solution I
Solution II
Solution III
50mM Glucose
25mM Tris-Cl (pH 8.0)
10mM EDTA (pH 8.0)
(autoclave)
0.2N NaOH (10N을 만들어 만들때마다 stock 해서 씀)
1%SDS (Fresh ,37℃ 보관)
5M Potassium acetate 60ml
Glacial acetic acid 11.5ml
DDW 28.5ml (4℃에서 보관)
Cell wall 깨버림
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2013.12.10
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