생화학실험 - 종이 크로마토그래피를 이용한 당류의 분석
●실험목적: 종이 크로마토그래피의 원리를 이해하고 미지시료를 알아내자.
●실험원리
크로마토그래피는 혼합물로부터 그 성분을 순수하게 분리하거나 확인,정량하는 데 매우 편리한 방법이다. 물에는 녹지 않으나 유기용매에 잘 녹는 물질을 흡착제에 대한 흡착성의 차이를 이용하여 분리할 수 있고(흡착 크로마토그래피), 이온화하는 수용성 물질을 분리하는 데에는 이온교환 크로마토그래피가 이용된다. 또한 혼합물의 성분들이 서로 섞이지 않는 두가지 용매에 다 같이 녹지만 이 두 용매에 대한 용해도의 차이가 있을 경우 분배 크로마토그래피에 의해 그 성분을 각각 분리 할 수 있다.
종이 크로마토그래피는 원리상으로는 분배 크로마토그래피의 일종으로 거름종이에 흡착된 용매(물)는 정지상 구실을 하고 물과 잘 섞이지 않는 유기용매는 이동상 구실을 한다. 그리고 거름종이는 정지상의 지지체가 된다.
종이 크로마토그래피는 아주 미량의 물질을 정성적으로 확인하는 데 아주 편리한 방법이다. 혼합물인 시료의 용액을 거름종이 위에 점적하고 말린 다음 물로 포화된 유기용매 속에 한 쪽 끝을 담가 두면 용매는 모세관 인력으로 인하여 종이 위쪽으로 퍼져 올라가거나(상행전개법), 또는 중력에 의해 아래 방향으로 이동하게 된다(하행전개법) 이 때 시료의 성분들도 용매와 함께 이동하지만 이동하는 동안에 물과 유기용매에 대한 용해도의 차이에 따라 이동속도가 다르다. 즉 유기용매에 잘 녹는 성분은 덜 녹는 성분보다 먼 데까지 이동한다. 이리하여 혼합물의 성분은 거름종이 위에서 분리된다.
종이 위에서 분리된 각 성분의 위치는 이들이 무색일 경우 적당한 발색시약을 뿌려서 쉽게 확인할 수 있다. 또 각 성분의 이동거리는 Rf값으로 나타낸다.
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2017.03.19
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